人血栓前體蛋白(TpP)ELISA試劑盒洗滌方法：

1. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔加入洗滌液350μl，注入與吸出間隔60秒。洗板5次。

2. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μl，浸泡1-2分鐘，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時(shí)，均需充分混勻，并盡量避免起泡。

1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.棄去液體，甩干，每個(gè)孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制)，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育1小時(shí)。

3.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。

4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時(shí)。

5.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

6.每孔加底物溶液100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長，但不可超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí)，即可終止)。

7.每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。

8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測程序。

9.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。

人胚肺二倍體細(xì)胞；KMB-17

人胚腎細(xì)胞；293 [HEK-293]

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞；HUV-EC

人肺細(xì)胞；HLF-a

人胚肺成纖維細(xì)胞；WI-38 [WI38]

人胎兒胸腺細(xì)胞株；HFT-8810 [HFT8810]

人胚肺成纖維細(xì)胞；HFL1

人胚腎細(xì)胞；293 [HEK-293]

人羊膜細(xì)胞；HA

人胚肺成纖維細(xì)胞；HFL-I

人肝細(xì)胞；HL-7702[L-02]

人肝細(xì)胞；QSG-7701 [QSG7701]

人胚肺成纖維細(xì)胞；WI-38 [WI38]

人張氏肝細(xì)胞；Chang liver

人羊膜細(xì)胞；WISH

人胚肺成纖維細(xì)胞；MRC-5

人乳腺浸潤性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞；CCD-1095Sk

人正常乳腺細(xì)胞；Hs 578Bst

人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞；NK-92 [NK92]

人B淋巴母細(xì)胞；HMy2.CIR

人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞；NK-92MI [NK92MI]

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞；HUV-EC-C

人正常乳腺上皮細(xì)胞；MCF 10A

人胚腎細(xì)胞；2V6.11

人正常肺上皮細(xì)胞；BEAS-2B

人肺成纖維細(xì)胞；HFL1

人胚肺成纖維細(xì)胞；IMR-90