人胚胎肺成纖維細(xì)胞；WI-38價(jià)格質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。

人胚胎肺成纖維細(xì)胞；WI-38價(jià)格操作步驟：

1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  WI-38人二倍體細(xì)胞系來自妊娠3個(gè)月的正常胚胎肺組織。 該細(xì)胞系是首株用于人類疫苗制備的人二倍體細(xì)胞系。 培液中添加TNF alpha可以促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
傳代方法  消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況 P(15+5)
凍存條件  *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。

多粘菌素 B 硫酸鹽    100mg
E.coli DNA 聚合酶 Ι    500U
E-64 蛋白酶抑制劑，20mg/mL    10mL
Earle 溶液    100mL
EBY100 酵母菌種    1mL
ECD-G 固定液    250 mL
ECL 法地高雜交檢測(cè)試劑盒    5次
ECL 法生物素雜交檢測(cè)試劑盒    5次
EcoR I-Not I-BamH I 接頭    1nmol
EcoRI    2000U
EcoRV    1500U
EDTA 溶液 ,0.5M, 蛋白    10mL
EDTA 溶液，0.2M    1mL
EGTA 溶液 ,0.5mg/mL, 蛋白    10mL
EGY48 酵母感受態(tài)細(xì)胞    10×100μL
EGY48 酵母菌種    1mL
EHA103 農(nóng)桿菌菌種    1mL15（S）-HETE-d8 （100 ug）Techin； 15（S）-HETE-d8
5（S），15（S）-DiHETE （250 ug）5S，15S-dihydroxy-6E，8Z，10Z，13E-eicosatetraenoic acid； 5（S），15（S）-DiHETE
ω-3 Arachidonic Acid-d8 （10 mg）8Z，11Z，14Z，17Z-eicosatetraenoic-8，9，11，12，14，15，17，18-d8 acid； ω-3 AA-d8； ω-3 Arachidonic Acid-d8
Non-fat Dry Milk Assay Reagent （5 g）Non-fat Dry Milk Assay Reagent
Rabbit Anti-Sheep IgG Precoated Solid Plate （1 ea）Rabbit Anti-Sheep IgG Precoated Solid Plate
17-phenyl trinor Prostaglandin F2α AChE Tracer （500 dtn）Bimatoprost AChE Tracer； 17-phenyl trinor Prostaglandin F2α AChE Tracer
15（S）-HpEDE （50 ug）15S-hydroperoxy-11Z，13E-eicosadienoic acid； 15（S）-HpEDE
Anti-sPLA2 （human Type IIA） EIA Strip Plate （5 ea）Secretory Phospholipase A2 （human synovial）； Anti-sPLA2 （human Type IIA） EIA Strip Plate
Melanocortin Assay α-MSH Positive Control （10 ul）Melanocortin Assay α-MSH Positive Control
Tris-Glycine Stock Solution （10X） （500 mL）Tris-Glycine Stock Solution （10X）
2-O-methyl PAF C-16 （5 mg）1-O-hexadecyl-2-O-methyl-sn-glyceryl-3-phosphorylcholine； 2-O-methyl PAF C-16
2-Arachidonyl Glycerol ether （10 mg）5Z，8Z，11Z，14Z-eicosatetraen-2-glyceryl ether； 2-AG ether|Noladin； 2-Arachidonyl Glycerol ether
Oleyl Trifluoromethyl Ketone （10 mg）1，1，1-trifluoro-10Z-nonadecen-2-one； OTK|Heptadecyl Trifluoromethyl Ketone； Oleyl Trifluoromethyl Ketone
EHA105 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞    10×100μL
EHA105 農(nóng)桿菌菌種    1mL