人正常角膜上皮細胞；HNCEC/HL-008圖片【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人正常角膜上皮細胞；HNCEC/HL-008圖片
形態(tài)特性  上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 未定
細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

氯化銫    10g
氯化硝基四氮唑蘭    500mg
氯化血紅素    1g
氯化乙酰膽堿    1g
氯霉素    5g
氯霉素干粉    1g
氯霉素溶液 ,25mg/mL    10mL
氯萘酚溶液，3mg/mL    250mL
M13 噬菌體單鏈基因組 DNAout    50 次
M13mp18DNA    10μg
M13mp18DNA    10μg
M15 感受態(tài)細胞    0.1 mL×10
M15 菌種    1mL
m7G(5′)ppp(5′)A 帽結(jié)構(gòu)類似物    25 OD
m7G(5′)ppp(5′)G 帽結(jié)構(gòu)類似物    25 OD
MAL 指示劑培養(yǎng)基    100mL
MALDI 蛋白樣品處理試劑盒    500 次
Maximov 固定液    250 mLDiaEasy Dialyzer (3 ml) MWCO 50 kDaDiaEasy Dialyzer (3 ml) MWCO 50 kDa
12-R)-HETE Lipid Maps MS Standard (250 ug)12-R)-HETE Lipid Maps MS Standard, 12R-hydroxy-5Z,8Z,1E,14Z-eicosatetraenoic acid
13-S)-HODE methyl ester (5 mg)13-S)-HODE methyl ester, 13S-hydroxy-9Z,11E-octadecadienoic acid, methyl ester
-+)-Muscarine -iodide salt) (5 mg)-+)-Muscarine -iodide salt), 2,5-anhydro-1,4,6-trideoxy-6-(trimethylammonio)-D-ribo-hexitol, iodide
EAM2201 (1 mg)JWH 21 N-(5-fluoropentyl) analog, EAM2201, (4-ethyl-1-naphthalenyl)[1-(5-fluoropentyl)-1H-indol-3-yl]-methanone
YM-53601 (10 mg)YM-53601, 2-[(2E)-2-(1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylidene)-2-fluoroethoxy]-9H-carbazole, monohydrochloride
Fumonisin B1 (50 mg)Fumonisin B1, 1,2,3-propanetricarboxylic acid, 1,-1’-[1-(12-amino-4,9,11-trihydroxy-2-methyltridecyl)-2-(1-methylpentyl)-1,2-ethanediyl] ester
(R)-(+)-Eicosapentaenyl-1 -Hydroxy-2 -Propylamide (1 mg)(R)-(+)-Eicosapentaenyl-1 -Hydroxy-2 -Propylamide, N-((R)-1-hydroxypropan-2-yl)icosa-5Z,8Z,11Z,14Z,17Z-pentaenamide
海藻酸（500GM）Alginic Acid， CAS 9005-38-3
七水硫酸亞鐵（100GM）Ferrous Sulfate， 7H2O， CAS# 7782-63-0； ≥99.5%
一水氯化錳（1KG）Manganese Sulfate， H2O， CAS# 10034-96-5； ≥98%
氫氧化（500GM）Sodium Hydroxide， CAS# 1310-73-2； MW 40
MboI    500U
McCoy's5A 培養(yǎng)基 ( 含 1% 雙抗 )    500mL
McCoy's5A 培養(yǎng)基 ( 含 1% 雙抗 +10% 小牛血清 )    500mL
MDS 42recA trfA 菌種    1mL
MDS 42recA 菌種    1mL