雜交瘤細(xì)胞株；3D8圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 雜交瘤細(xì)胞株；3D8圖片
形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 未定

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

STAT5  信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5抗體規(guī)格: 0.1ml
RAD21  核基質(zhì)蛋白21抗體規(guī)格: 0.2ml
HSP10/CPN10  熱休克蛋白10抗體規(guī)格: 0.2ml
RNF139  環(huán)指蛋白139抗體規(guī)格: 0.2ml
Tissue factor/CD142/F3  組織因子抗體 0.1ml
MAGP2  纖微絲相關(guān)糖蛋白2抗體規(guī)格: 0.1ml
TSSK6/CT72  睪特異絲氨酸/蘇氨酸激酶6抗體規(guī)格: 0.2ml
Phospho-Acetyl CoA Carboxylase(Ser79)  磷酸化乙酰輔酶A羧化酶抗體 0.1ml
sLOX 1  可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1抗體規(guī)格: 0.2ml
C17orf97  17號(hào)染色體開放閱讀框97抗體規(guī)格: 0.2ml
ABCG4  ABC膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 0.1ml
KLF9/BTEB1  轉(zhuǎn)錄因子KLF9抗體規(guī)格: 0.1ml
BEND2/CXorf56  BEND2蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
Mouse Anti-human IgG(3D3)/FITC  FITC標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體規(guī)格: 0.1ml
Integrin beta 7  整合素β7抗體規(guī)格: 0.1ml
HAND1  心臟和神經(jīng)嵴衍生蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Mink IgG/APC  APC標(biāo)記的兔抗水貂IgG規(guī)格: 0.1ml
IL-17  白介素-17抗體規(guī)格: 0.1ml
Proteasome 26S S2/TRAP2  瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白2抗體規(guī)格: 0.2ml
Rabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈規(guī)格: 0.1ml
API5  凋亡抑制因子5抗體規(guī)格: 0.1ml15mL DNA 離心超濾管 (30-50 KD)    1個(gè)    120668L-1
15mL        蘇木素染色液
5次        大提柱式血液 RNAout
20 次        酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒
0.1mL×10        Tuner(DE3)plysS 感受態(tài)細(xì)胞
核糖核酸酶 H    600U    120413-600
DNA 溶解液    10mL    131167-10
10 次        糖蛋白染色試劑盒
10mL        E-64 蛋白酶抑制劑，20mg/mL
9mL        即用型高保真 PCR 試劑盒
3000U        RNase 抑制劑 ( 小鼠源 )
RNAi，RNA 干擾載體及基因片段等    2 μg    31
單細(xì)胞全轉(zhuǎn)錄組擴(kuò)增試劑盒     24 次    140450-24
25mg        無(wú)內(nèi)毒素螢火蟲熒光素
100 T        GSH—ST 測(cè)試盒
1mg        親和素
50 次        LAMP 擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照
2-( 環(huán)己胺基 ) 乙烷磺酸    5g    CAS103-47-9
GV3101 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞    10×100μL    140384-10
5mL        新生溶液 ,50mg/mL
1000U        核酸內(nèi)切酶 VIII