綿羊肺細(xì)胞；OAR-L1說(shuō)明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 綿羊肺細(xì)胞；OAR-L1說(shuō)明書
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞系來(lái)源于一雌性綿羊的肺組織。1990年由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)建立。 
培養(yǎng)條件  McCoy's 5A Media (Modified with Tricine)  15%NBS
傳代方法  1：2傳代；3-4天一次
傳代情況 P2
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

Raji(人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
Dami(人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
MSTO-211H(人肺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
RH-35(大鼠肝細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
II型膠原酶(含100mL酶解緩沖液)    10mL            
CHL(倉(cāng)鼠肺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
Flag Tag IP/Co-IP Kit/Flag標(biāo)簽免疫沉淀試劑盒    25次        試劑盒    
小鼠食管上細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
BC-019(人腺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
小鼠腸上細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
胰酶細(xì)胞消化液    規(guī)格：        100ml    
人胎盤絨毛膜細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
MCPC培養(yǎng)基添加劑/MCPC Medium Supplement    每瓶添加于100ml MCPC培養(yǎng)基中    國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口    5毫升    
人卵巢細(xì)胞    英文名稱：        HO-8910    
大腸桿菌&大腸菌群顯色培養(yǎng)基/E.Coli&Coliform Chromogenic Medium    同時(shí)檢測(cè)大腸菌群和大腸桿菌，培養(yǎng)24小時(shí)，大腸桿菌顯紫色，大腸菌群顯紅色    國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口    1升    
尼氏(Nissl)染色液    規(guī)格：        100ml    
賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基/Lysine Decarboxylase Medium    用于細(xì)菌賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)    國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口    5克  瓊脂糖凝膠 2B    CAS9050-94-6    100mL
SDS-PAGE 分離膠配膠液    100868-500    500mL
10 次    柱式植物 mtDNAout，測(cè)序    
10g    硫酸葡聚糖    
5 mg    羧肽酶 B( 豬胰 )    
50 T    ATP 酶測(cè)試盒 ( 組織及細(xì)胞膜需高速離心 )    
羧肽酶 B( 豬胰 )    CAS9025-24-5    5 mg
山羊抗小鼠 IgG(H+L), 堿性磷酸酶標(biāo)記    131144-100    100μL
大提柱式動(dòng)物 RNAout    80901-5    5次
50 次    木材 DNAout    
10g    4- 甲基傘形酮    
5mL    卵巢上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子    
1.5mL    β- 乙醇，電泳    
尿道上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子    21-0240-5     5mL
RNase-free Tris HCl,1M,pH 6.5    60704-100    100mL
2mg    PD 98059(MAPKK 抑制劑 )    
250 mL    Baker 甲醛鈣中性固定液    
18mg    Insulin    
100g    RNA  EDTA·2Na ( 乙二胺四二 )    
L-Arginine(NO 前體 )    23-0360-5    5g
柱式尿液 DNAout    90314-50    50 次
100mL    RNA 電泳液 ,10×    
100 μL    COX IV 小鼠單抗    
5mL    dNTP 溶液，2.5mM