豬睪丸細胞；ST說明書【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 豬睪丸細胞；ST說明書
形態(tài)特性  成纖維細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞為二倍體，對豬細小病毒、腸道病毒敏感。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3-1:8，每周換液2次
傳代情況 P120
凍存條件  基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR 
同工酶 
染色體 
使用權限 A類

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內出現(xiàn)任何問題，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內，吸除或倒掉細胞瓶內舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉移到無菌離心管內，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

UM-UC-3(人膀胱移行細胞)    5×106cells/瓶×2            
胰月示-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸瓊脂基礎/TSC瓊脂/TSC Agar    產氣莢膜梭菌的平板計數(shù)    國產/進口    250克    
RN-h, 大鼠海馬趾神經(jīng)元                
HS 683(人腦膠質瘤細胞)    5×106cells/瓶×2            
NCI-H23(人非小細胞肺細胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
小鼠海馬神經(jīng)膠質細胞（EGFP標記）                
水楊苷發(fā)酵管    BR    國產/進口    20支    
Hacat(人永生化角質形成細胞)    5×106cells/瓶×2            
G-401(人腎Wilms細胞)    5×106cells/瓶×2            
MuM-2C(人眼脈絡黑色素瘤細胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
S-180(小鼠肉瘤細胞)    5×106cells/瓶×2            
Inclusion body Denature Reagent/包涵體蛋白溶解液    100ml        國產    
COLO 205(人結腸細胞)    5×106cells/瓶×2            
G-401(人腎Wilms細胞)    5×106cells/瓶×2            
小鼠胎兒表角質形成層細胞*培養(yǎng)基    100mL            
BCA蛋白定量試劑盒    500次        國產    
小鼠成纖維細胞    英文名稱：        3T3    
胰酶細胞消化液(含酚紅)    規(guī)格：        100ml  1mL    植物蛋白酶抑制劑    
綠豆核酸酶    120408-1000    1000U
雜交袋    90206-20    20 個
50L    Tricine-SDS-PAGE 陰極電泳液 ( 干粉 )    
100 次    動物種屬鑒定 PCR Mix 4    
50 次    DNA 電泳分子量標準 (3)φX174 DNA/Hae Ⅲ    
100U    DNA 促旋酶 (E.coli)    
D- 甘露醇    CAS69-65-8    250g
十二烷基磺酸    131049-100    100g
50 次    柱式水樣 DNAout    
10mg    莽草酸    
100g    矮壯素    
100mL    RNase-free CTAB 溶液 ,20%    
1mL    Y187 酵母種    
ATP 依賴的 DNase    120510-200    200U
環(huán)狀 DNA 全基因組擴增試劑盒    100947-30    30 次
10mL    微量核酸沉淀劑    
1g    Hemoglobin(NO 清除劑 )    
5g    D(+) 木糖    
250 mL    Zamboni 固定液    
維生素 B1    CAS59-43-8    10g
成骨細胞生長因子    21-0010-5     5mL