小耳豬肺細胞；SEP-L2說明書【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 小耳豬肺細胞；SEP-L2說明書
形態(tài)特性  成纖維細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞系來源于一雄性小耳豬的肺組織。1988年由中國科學院昆明細胞庫建立。 
培養(yǎng)條件  M-199: with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS)  15%NBS
傳代方法  1：2傳代；3-4天一次
傳代情況 P2
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 B類

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

人永生化角質(zhì)細胞    英文名稱：        Hacat    
EB增菌肉湯培養(yǎng)基基礎(chǔ)/EB增菌液/EB Enrichment Broth Medium    單核細胞增生李氏特菌增菌    國產(chǎn)/進口    250克    
人臍動脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基    100mL            
V-P半固體瓊脂/Voges-Proskauer Semisolid Agar    細菌V-P試驗    國產(chǎn)/進口    250克    
人肺動脈成纖維細胞*培養(yǎng)基    100mL            
肌醇測定培養(yǎng)基/Inositol Assay Broth    嬰幼兒配方食品和粉中肌醇測定    國產(chǎn)/進口    250克    
大鼠主動脈內(nèi)細胞*培養(yǎng)基    100mL            
品紅亞硫酸鈉瓊脂/Fuchsin Basic Sodium Sulfite Agar    飲用水,水源中總大腸菌群的選擇性分離和確認    國產(chǎn)/進口    250克    
大鼠成肌細胞    英文名稱：        L6    
小牛血清/Calf serum    診斷試劑用    國產(chǎn)/進口    200毫升    
SNU-5(人胃細胞)    5×106cells/瓶×2            
NCI-H446(人小細胞肺細胞)    5×106cells/瓶×2            
OS-RC-2(人腎細胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
HELF(人胚肺成纖維細胞)    5×106cells/瓶×2            
MDA-MB-175VII(人腺導(dǎo)管細胞)    5×106cells/瓶×2            
Lncap clone FGC(人前列腺細胞)    5×106cells/瓶×2DNA 提取技術(shù)服務(wù)    D001-1    1 個樣
酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞制備試劑盒    81201-20    20 次
100μL    小鼠抗 GFP 標簽單抗    
20 次    即用型藍白 T 載體 E 型 ( 無啟動子，無 MCS)    
25g    N-2- 羥乙基 -N’-2- 乙基磺酸    
2000U    EcoRI    
100mL    杜氏 PBS 緩沖液 ,10×    
Actinomycin D( 基因轉(zhuǎn)錄抑制劑 )    23-0060-1    1mg
微量樣品核酸提取試劑盒    80930-50    50 次
1.5mL    溶酶溶液，10mg/mL    
10mL    DNA 溶解液    
50 次    蛋白膠微量回收試劑盒    
5mg    硫氧還蛋白    
二硫蘇糖醇 (DTT)    CAS3483-12-3    5g
植物總蛋白質(zhì)微量提取試劑盒 (SDS-PAGE)    81218-30    30 次
10 次    預(yù)染蛋白質(zhì)電泳分子量標準 (14.4-97.4KD)    
100 次    抗干擾 Taq DNA 聚合酶    
10g    次(亞)甲基蘭    
20 次    克必隆零背景 T 載體    
聚乙二醇溶液    CAS25322-68-3    25mL
蛋白磷酸酶抑制劑混合液 1    80809-1    1mL
50 次    柱式動物 RNA-DNA 雙提試劑盒