牦牛皮膚細胞；BMU-S1說明書【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 牦牛皮膚細胞；BMU-S1說明書
形態特性  成纖維細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞系來源于一雄性黑牦牛的皮膚組織。1996年由中國科學院昆明細胞庫建立。 
培養條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  15%NBS
傳代方法  1：2傳代；3-4天一次
傳代情況 P4
凍存條件  基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權限 A類

細胞培養步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產品全部經過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內出現任何問題，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內，吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉移到無菌離心管內，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養。

YEB Agrobacterium Growth Medium    BR    國產/進口    100克    
人非小細胞肺細胞    英文名稱：        NCI-H358    
酵母粉葡萄糖氯霉素瓊脂/YGC瓊脂/YGC Agar    食品中霉素及酵母菌總數測定    國產/進口    250克    
大鼠牙細胞*培養基    100mL            
葡萄糖瓊脂/Dextrose Agar    腸桿菌科的葡萄糖發酵試驗    國產/進口    250克   刺毛鼠肺成纖維樣細胞    英文名稱：        CWbRL    
亞碲酸鹽卵黃增菌液/Egg-Yolk lurite Emulsion    金黃色葡萄球菌的選擇性分離；貝爾德-帕克基礎配套試劑    國產/進口    50毫升    
SK-MES-1(人肺鱗細胞)    5×106cells/瓶×2            
NCI-H524(人非小細胞肺細胞)    5×106cells/瓶×2            
NR8383(大鼠肺泡巨噬細胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
LS 180(人結腸腺細胞)    5×106cells/瓶×2            
MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14)    5×106cells/瓶×2            1個    冰袋    
1個    熒光尺    
乙酰丁香酮    CAS2478-38-8    1g
無脊椎動物種屬鑒定 PCR Mix    131128H-100    100 次
10mL    X-Gal 溶液，20mg/mL    
10g    甘氨酸二肽    
250mg    新生    
10 次    百萬堿基植物 DNAout     
秋水仙素    CAS64-86-8    100mg
BL21-CodonPlus-RIL 種    12-119    1mL
5mL    雪旺細胞生長因子    
10000U    核糖核酸酶 RNase If    
25mg    熒光胺    
10 次    ConA 糖蛋白分離試劑盒    
葡萄糖氧化酶    CAS9001-37-0    10Ku
穿刺培養基    100826-10    10 管
50 次    一站式柱式 miRNAout    
100mL    交聯瓊脂糖凝膠 2B    
25g    L- 亮氨酸    
60μL    驢抗山羊 IgG，辣根過氧化物酶標記    
萘啶酮酸    CAS389-08-2    5g
小鼠抗 GST 標簽單抗    130577-1000    1000μL
K-562(人慢性骨髓性白血病細胞)    5×106cells/瓶×2            
Hela, 人宮頸細胞系                
中性蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)    10mL            
CFPAC-1(人胰腺細胞)    5×106cells/瓶×2            
小鼠甲狀腺上細胞*培養基    100mL            
5637(人膀胱細胞)    5×106cells/瓶×2