大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細(xì)胞；BOS-5說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細(xì)胞；BOS-5說明書
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細(xì)胞系來源于一雌性大額牛與婆羅門牛雜交F1代的耳部皮膚組織，2010年由中科院昆明細(xì)胞庫建立。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法  1：2傳代；3-4天一次
傳代情況 P2
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 B類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

F9(小鼠畸胎瘤細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
GoldCassette-TRX/TRX重組標(biāo)簽蛋白快速檢測試劑盒(精裝)    2次        2次、10次    
小鼠胰腺上細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
BRL(大鼠肝細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
小鼠肺細(xì)胞    英文名稱：        Lewis    
Cell Counting Kit-8 (CCK-8試劑盒)    規(guī)格：        100次    
人小氣道平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
Korser氏肉湯發(fā)酵管    BR    國產(chǎn)/進(jìn)口    20支    
人腦血管平滑肌細(xì)胞                
標(biāo)準(zhǔn)平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基/SPCA    用于細(xì)菌總數(shù)的計數(shù)    國產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
人成纖維瘤細(xì)胞    英文名稱：        HT1080    
聚山梨酯80培養(yǎng)基(需氧、厭氧菌)/Tween80 Medium(Bacteria)    油劑藥品的無菌試驗(yàn)    國產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
大鼠胃粘膜上細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
青霉素敏感紙片    炭疽桿菌檢測用配套試劑    國產(chǎn)/進(jìn)口    20片    
Y1(Y-1) (小鼠腎上腺質(zhì)細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
耶爾森氏菌顯色培養(yǎng)基        國產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
SF-295(人XG惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
MS751(人子宮頸表細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2  
DNA  Tween 20    131024-100    100mL
250mg    噻唑蘭    
50 次    DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (3)φX174 DNA/Hinc Ⅱ    
50 次    柱式糞便 DNAout    
1mL    XL1-Blue 種    
Klenow 片段 (3´ → 5´ exo-)    131235-200    200U
柱式 OLIGO 回收試劑盒    80401-50    50 次
1g    羧芐青    
30 次    單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒    
30 次    一站式蛋白質(zhì)非變性 PAGE 套裝 ( 中 pH)    
1000μL    組蛋白 3.1 小鼠單抗    
核酸外切酶 T    130627-250    250U
海藻糖溶液，1.5M，PCR     130506-1.5    1.5mL
30mL    天凈沙核酸濃縮劑    
1mL    EGY48 酵母種    
100mL    一管式 TMB 顯色液 A( 可溶型 )     
24 次    凋亡 DNAout    
N- 乙酰 -L- 半胱氨酸    CAS616-91-1    5g
兩棲類和爬行類動物種屬鑒定 PCR Mix    131128I-100    100 次
2000U    XhoI