長尾綠猴腎細胞；4647說明書【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 長尾綠猴腎細胞；4647說明書
形態特性  上皮細胞樣為主
生長特性 貼壁生長
特征特性   
培養條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  優質胎牛血清，10%
傳代方法  消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。
傳代情況 PN5
凍存條件  *培養基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權限 A類

細胞培養步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產品全部經過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內出現任何問題，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內，吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉移到無菌離心管內，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養。

人前脂肪細胞*培養基    100mL            
TE-11(人食管細胞)    5×106cells/瓶×2            
TBX培養基/TBX Agar/Tryptone Bile X-glucuronide Agar    檢測大腸菌群，大腸菌群培養24小時，顯蘭色    國產/進口    1升    
人肝動脈內細胞*培養基    100mL            
哥倫比亞血瓊脂基礎/Columbia Blood Agar Base    各種細菌的基礎培養基    國產/進口    250克    
貂肺上細胞    英文名稱：        Mv 1 lu    
腦心浸液/無瓊脂腦心浸液/腦心浸液肉湯/BHI    用于金黃色葡萄球菌的培養    國產/進口    250克    
大鼠肝動脈平滑肌細胞*培養基    100mL            
西蒙氏檸檬酸鹽培養基/西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂/Simmons Citrate Agar    用于腸道菌的檸檬鹽利用試驗    國產/進口    250克    
Stripping Buffer/蛋白印跡膜再生液    500ml        100ml、500ml    
QG-56(人肺扁平上細胞)    5×106cells/瓶×2            
PBS    規格：    gersion    500ml    
NCI-H460(人肺細胞)    5×106cells/瓶×2            
mEPC, 小鼠內祖細胞-骨髓        gersion        
MLTC-1(小鼠睪間質細胞瘤細胞)    5×106cells/瓶×2            
HL-60, 人早幼粒白血病細胞                
Anglne(人卵巢細胞)    5×106cells/瓶×2   5次    隨機引物法 DNA 探針標記試劑盒    
1個    帶柄尼龍篩    
20L    半干法電轉液 ( 干粉 )    
30μL    α-Tubulin 小鼠單抗    
核酸內切酶 VIII    130642-1000    1000U
MnCl2溶液，25mM，PCR     130307-5    5mL
20 次    天凈沙 Ribo-SPIA cDNA 擴增試劑盒    
1500U    EcoRV    
200mL    體內毒素清除劑    
1mL    胚胎裂解液    
ELISA 試劑盒    33    48/96T
動物種屬鑒定 PCR Mix 4    131128D-100    100 次
25μg    Xa 因子蛋白酶    
10mL    鈣蛋白酶抑制劑Ⅱ溶液，10mg/mL    
10g    2-(N- 啡啉 ) 乙磺酸    
10 次    Southern 血液 DNAout    
氯化膽堿    CAS67-48-1    100g
AG1 種    12-284    1mL
100 次    溴化乙錠清除劑    
25mg    核糖核酸酶 A，牛胰    
100mg    透明質酸酶    
1套    GST 固定試劑盒    
姬姆色素染料    CAS51811-82-6    1g
LB 平板培養基 無抗    130848A-10    10 塊
30 次    一站式長效期 SDS-PAGE 電泳套裝 (>30KD)