產品屬性：

名稱    CIK細胞
產品概述

CIK細胞，即細胞因子誘導的殺傷細胞(Cytokine-Induced Killer，CIK)是一種新型的免疫活性細胞，CIK增殖能力強，細胞毒作用強，具有一定的免疫特性。

由于該細胞同時表達CD3+和CD56+兩種膜蛋白分子，故又稱為NK細胞（自然殺傷細胞）樣T淋巴細胞，兼具有T淋巴細胞強大的抗瘤活性，和NK細胞的非MHC限制性殺瘤優(yōu)點。該細胞對腫瘤細胞的識別能力很強，

CIK細胞可以通過多機制抗腫瘤、抗病毒：

1.CIK細胞能以不同的機制識別腫瘤細胞，通過直接的細胞質顆粒穿透封閉的腫瘤細胞膜進行胞吐，釋放穿孔素、顆粒酶，實現(xiàn)對腫瘤細胞的裂解；

2.CIK細胞能分泌IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6等多種炎性細胞因子，對腫瘤也有直接抑制作用；

3.CIK細胞可以通過配體-受體（Fas:FasL）介導的方式誘導腫瘤細胞凋亡，因此CIK尤其適用于FasL陽性腫瘤的治療；

4.CIK細胞分泌的細胞因子能顯著刺激初始型T細胞增殖，有效激活機體的免疫系統(tǒng)，使之趨于正常，提高病人自身抗腫瘤的能力。

目前，腫瘤的發(fā)生機制尚未形成普遍接受的理論。研究者普遍認可腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與人體的免疫功能密切相關。即在正常情況下，腫瘤與機體的防御機能之間處于一種動態(tài)的平衡，而一旦這種平衡被破壞，就可能發(fā)生腫瘤。身體各組織細胞受到外界化學、物理、生物等因素刺激或自身細胞衰老變異等因素的影響，使得體內某些細胞發(fā)生突變，成為癌前細胞；而機體免疫功能低下或者由于免疫異常，無法及時識別、殺傷、清除這些異常細胞，突變細胞在組織內復制生長，達到一定數(shù)量后破壞器官功能，腫瘤即發(fā)生。腫瘤患者，尤其是惡性腫瘤病人往往免疫功能、特別是細胞免疫功能低下，因而疾病呈進展、活動、預后差。因此，提高機體免疫力，建立有效的免疫應答是治療腫瘤有希望的途徑。CIK細胞治療即將大量殺傷性高、功能強、數(shù)量多的免疫活性細胞回輸患者體內，直接發(fā)揮殺死腫瘤細胞的作用，并通過調節(jié)、激活患者的免疫體系，調動、提高患者自身的抗腫瘤能力。

CIK細胞具有以下突出的特點：

1.增殖速度快，殺瘤活性高。CIK細胞可以在體外大量擴增，培養(yǎng)14天可以增殖200倍以上，其效應細胞CD3+CD56+的增殖可達1000倍以上，抗腫瘤活性得以大大增強。

2.殺瘤譜廣。CIK細胞對腫瘤細胞的殺傷是非MHC限制的，對多種腫瘤細胞均有殺滅作用。

3.能抵抗腫瘤細胞引發(fā)的效應細胞Fas-FasL凋亡。CIK細胞雖然在Fas被占據(jù)后會引起少量細胞凋亡，但對其殺瘤細胞毒性沒有明顯影響；反之，CIK細胞可以誘導FasL陽性腫瘤細胞的凋亡。

4.對多重耐藥腫瘤細胞同樣敏感。CIK細胞對放、敏感的親本細胞和不敏感的轉化細胞均具有強大的殺傷活性。

5.CIK細胞殺瘤活性不受CsA（A）和FK506（普樂可復）等免疫抑制劑的影響。

6.對正常骨髓造血前體細胞毒性小，僅對紅系生成產生輕微的抑制，這可能與CIK細胞自身分泌高水平的IFN-γ有關。

7.CIK細胞具有識別腫瘤的機制，特異性強，對正常的細胞無毒性作用。

8.安全性好。CIK細胞是活化的患者自體細胞，應用安全，不會產生排斥等反應，患者副反應小。

冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
實驗報告：
產品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
細胞骨架銜接蛋白BIN3抗體

Bcr抗體

磷酸化乳腺癌易感基因1抗體(人)

磷酸化T淋巴細胞受體抗體

B淋巴細胞連接蛋白抗體
人γ干擾素(IFN-γ)抗體elisa分析檢測試劑盒

人γ干擾素(IFN-γ)elisa分析檢測試劑盒

人γ分泌素激活蛋白(PION)elisa分析檢測試劑盒

人γ分泌酶elisa分析檢測試劑盒

人γ氨基丁酸(GABA)elisa分析檢測試劑盒
CIK細胞小鼠肺炎支原體(MP)抗體(IgG)elisa分析檢測試劑盒

小鼠肺炎支原體(MP)抗體(IgG)elisa檢測試劑盒

小鼠分化簇抗原30配體(CD30L)elisa檢測試劑盒

小鼠分泌粒蛋白Ⅱ(SCG2)elisa檢測試劑盒

小鼠分泌型卷曲相關蛋白1(SFRP1)elisa檢測試劑盒