冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品屬性：

名稱    Hce-8693 (盲腸腺癌細(xì)胞(未分化)) (STR鑒定正確)
別稱 Hce-8693; HCE-8693; Hce8693; HCE8693

種屬 人類

年齡（性別） 男性

組織來源 盲腸未分化腺癌；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

背景描述 Hce-8693細(xì)胞源自一位男性盲腸未分化腺癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病理切片。Hce-8693細(xì)胞的倍增時(shí)間是30.4小時(shí)，有絲分裂指數(shù)是28.8%。電子顯微鏡檢查，Hce-8693細(xì)胞呈現(xiàn)巨核，核仁分界明顯、微絲豐富，并有分泌顆粒。Hce-8693細(xì)胞染色體模式數(shù)是48，在軟瓊脂上成克隆的比率是8%。檢測(cè)表明，Hce-8693細(xì)胞培養(yǎng)液上清中CEA陽(yáng)性。當(dāng)異體移植到裸鼠時(shí)，Hce8693細(xì)胞長(zhǎng)成的瘤與患者原病灶一樣，在細(xì)胞質(zhì)中有阿爾新藍(lán)陽(yáng)性物質(zhì)。

生長(zhǎng)培養(yǎng)基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:2-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
JM110 感受態(tài)細(xì)胞10×100μL  Zinquin 乙酯5mg

XL2-Blue 感受態(tài)細(xì)胞10×100μL  Y2HGold 酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞10×100μL

DB3.1 感受態(tài)細(xì)胞10×100μL  Y187 酵母感受態(tài)細(xì)胞10×100μL

OrigamiB(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞10×100μL  XL2-Blue 感受態(tài)細(xì)胞10×100μL

BL21-CodonPlus(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞10×100μL  XL1-Blue 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞0.1mL×10
FITC標(biāo)記的錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A1抗體

FITC標(biāo)記的錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白13B抗體

FITC標(biāo)記的特異性錨樣蛋白1抗體

FITC標(biāo)記的ANKLE2蛋白抗體

FITC標(biāo)記的ANGEL2蛋白抗體
Hce-8693 (盲腸腺癌細(xì)胞(未分化))大鼠半乳糖凝集素7(GAL7)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠半乳糖凝集素9(GAL9)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠胞漿型磷脂酶A2(cPLA2)elisa分析檢測(cè)試劑盒

大鼠胞漿型磷脂酶A2(cPLA2)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠胞漿型磷脂酶A2（cPLA2）elisa檢測(cè)試劑盒
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。