冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產品屬性：

名稱    WISH (羊膜細胞) (Hela污染細胞系)
別稱 Wistar Institute, Susan Hayflick

年齡（性別） 女

組織來源 起源HeLa細胞污染

生長特性 貼壁細胞

細胞形態 上皮細胞樣

背景描述 最初以為，WISH細胞的起源是正常羊膜，但隨后通過同工酶分析、HeLA標記染色體和DNA指紋法分析，WISH細胞的起源是HeLa細胞污染的。WISH細胞角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。注意：WISH細胞包含HeLa標記染色體，是從HeLa污染細胞中建株的。

生物安全等級 2

生長培養基 MEM＋1mM Sodium Pyruvate＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:2-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

抗原表達情況 The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.

基因表達情況 The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining. The cells and tumors formed from the cells are positive for Dopa decarboxylase and are negative for the TAG-72 antigen.

保藏機構 ATCC; CCL-25 ATCC; CRL-7727 ECACC; 88102403

培養操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
Denhardt 溶液，50×100mL  甲酰胺，PCR 級5mL

鮭魚精 DNA 溶液1mL  加 T 試劑盒50 次

鯡魚精 DNA 溶液1mL  加 A 試劑盒50 次

小牛胸腺 DNA 溶液1mL  即用型長片段 PCR 試劑盒20 次

熒光尺1個  即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒50 次
大鼠3-硝基(3-NT)elisa檢測試劑盒

大鼠3-羥基-3-甲基戊二酰A合酶(HMGCS)elisa檢測試劑盒

大鼠3-O-甲基多巴(3-OMD)elisa檢測試劑盒

大鼠Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)elisa檢測試劑盒免費代測

大鼠Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)elisa檢測試劑盒
WISH (羊膜細胞) (Hela污染細胞系)大鼠Rho鳥苷酸交換因子7(Arhgef7/Pak3bp/Pixb)elisa分析檢測試劑盒

大鼠Rho鳥苷酸交換因子7(Arhgef7/Pak3bp/Pixb)elisa檢測試劑盒

大鼠Rho鳥嘌呤核苷酸交換因子7(ARHGEF7)elisa檢測試劑盒

大鼠Rho相關GTP結合蛋白RhoE elisa分析檢測試劑盒

大鼠Rho相關GTP結合蛋白RhoE elisa檢測試劑盒免費代測
實驗報告：
產品僅用于科研一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。