培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

產(chǎn)品屬性：

名稱    K-562 [K562] (慢性髓原白血病細(xì)胞) (STR鑒定正確)
別稱 K562; K 562; GM05372

種屬 人類

年齡（性別） 女性，53歲

組織來源 骨髓；慢性骨髓性白血病(CML)

生長(zhǎng)特性 懸浮細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 淋巴細(xì)胞樣

背景描述 連續(xù)細(xì)胞株K-562是由Lozzio從一位臨終的53歲女性慢性骨髓性白血病患者的胸水中建立。K-562細(xì)胞被歸入高度未分化的粒性白細(xì)胞類，Erson等對(duì)其表面膜性質(zhì)的研究表明，K-562細(xì)胞是一株人類紅白血病細(xì)胞。K-562細(xì)胞在自然殺傷分析中廣泛作為高敏感的體外受體，See Pross等將K-562細(xì)胞用于NK細(xì)胞的體外詳細(xì)檢測(cè)，包括NK細(xì)胞活性的數(shù)學(xué)量化。K-562母細(xì)胞是多能性造血惡性細(xì)胞，它能自發(fā)分化成可識(shí)別的紅血球祖細(xì)胞、粒性白細(xì)胞、單核細(xì)胞等。K-562細(xì)胞是EBNA陰性的。

生物安全等級(jí) 1

生長(zhǎng)培養(yǎng)基 IMDM＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 3×10^5-5×10^5cells/mL

推薦換液頻率 2~3次/周

倍增時(shí)間 ~30-48小時(shí)

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

致瘤性 Yes, in nude mice (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells).

注意事項(xiàng) 該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請(qǐng)注意離心收集細(xì)胞懸液；請(qǐng)勿直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液。

保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CCL-243 BCRC; 60007 BCRJ; 0126 CCLV; CCLV-RIE 0439 DSMZ; ACC-10 ECACC; 89121407

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
AKIRIN2蛋白抗體

ADP核糖基化樣因子8B抗體

三磷酸腺苷酶家族蛋白2抗體

AKIRIN1蛋白抗體

錨定蛋白樣蛋白1抗體
大鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域激酶2(Tie-2)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域激酶1(Tie-1)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶(LPO)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)

大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體β(PPAR-B/PPARD)elisa檢測(cè)試劑盒
K-562 [K562] (慢性髓原白血病細(xì)胞)大黃素甲醚含量試劑盒

大黃酸含量試劑盒

大鼠 8-羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠 E選擇素（E-Sel）elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠 Klotho elisa分析檢測(cè)試劑盒

冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。