細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

名稱    DLD-1 (結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞) (STR鑒定正確)
別稱 DLD 1; DLD1; CoCL3

種屬 人類

年齡（性別） 成人

組織來源 結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞

生長特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

背景描述 DLD-1細(xì)胞是由D·L·Dexter和其同事于1977-1979年分離的兩株結(jié)直腸腺癌細(xì)胞株中的一株。在ATCC和其它地方進(jìn)行的DNA指紋鑒定和染色體組型分析表明DLD-1細(xì)胞與HCT-15細(xì)胞相似，說明這兩者是來自同一個人的不同克隆。DLD-1細(xì)胞和HCT-15細(xì)胞的遺傳起源可通過DNA指紋鑒定證實(shí)，但染色體組型分析顯示它們?nèi)狈θ旧w標(biāo)記一致改變或數(shù)目上一致改變。DLD-1細(xì)胞的CSAp陰性(CSAp-)，p53抗原表達(dá)呈陽性(p53抗原產(chǎn)生了一個C→T點(diǎn)突變導(dǎo)致241位的Ser→Phe)。DLD-1細(xì)胞角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性，癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表達(dá)呈陽性，癌基因N-myc的表達(dá)未做檢測。DLD-1細(xì)胞表達(dá)腫瘤特異性核基質(zhì)蛋白CC-2、CC-3、CC-4、CC-5和CC-6。1979年提交到ATCC的DLD-1細(xì)胞代數(shù)不明且污染了支原體，其后經(jīng)過12周多種抗生素聯(lián)合培養(yǎng)處理，處理之后每周用Hoechst染色和標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)法檢測。其后連續(xù)11個月不加抗生素培養(yǎng)，DLD-1細(xì)胞所有的檢測呈陰性。

生物安全等級 1

生長培養(yǎng)基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

倍增時間 ~24-48小時

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

致瘤性 Yes, in nude mice (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells).

抗原表達(dá)情況 Blood Type O. The cells are weakly positive for keratins and vimentin. The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining. DLD-1 cells are positive for p53 antigen expression (the p53 antigen produced has a C -> T mutation re

基因表達(dá)情況 carcinoembryonic antigen (CEA) 0.5 ng/10^6 cells/10 days; colon antigen 3.

保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CCL-221 BCRC; 60132 DSMZ; ACC-278 ECACC; 90102540

使用方法：
收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

4mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)1個  綠如藍(lán)核酸染料 (UV)0.5mL

4mL DNA 離心超濾管 (30-50 KD)1個  綠如藍(lán)蛋白染液250 次

4mL DNA 離心超濾管 (90-150 KD)1個  綠如蘭核酸染料 ( 可見光型 )10mL

4mL DNA 離心超濾管 (150-250 KD)1個  卵巢上皮細(xì)胞生長因子5mL

4mL DNA 離心超濾管 (300-500 KD)1個  卵白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，2mg/mL1mL
大鼠免疫球蛋白M(IgM)elisa檢測試劑盒

大鼠免疫球蛋白G(IgG)elisa檢測試劑盒

大鼠免疫球蛋白E(IgE)elisa檢測試劑盒

大鼠免疫球蛋白A(IgA)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測

大鼠絡(luò)氨酸酶(TYR)elisa檢測試劑盒
DLD-1 (結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞)α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（α-L-Af）測試盒

α-L-巖藻糖苷酶AFU試劑盒 R：50ml×2 速率法

α-半乳糖苷酶（α-GAL）測試盒

α-AMS測試盒 100管/96樣 淀粉-碘比色法

α-測試盒
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