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產(chǎn)品型號：5ml
更新時間：2025-10-31
廠商性質(zhì)：經(jīng)銷商
訪問量：629
服務(wù)熱線021-39596320
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產(chǎn)品詳細介紹：
快速實時熒光定量PCR預混體系是專用于染料法(SYBR GreenⅠ)實時熒光定量PCR的預混體系，濃度為2×，包含F(xiàn)ast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I熒光染料和Mg2+，操作簡單方便。主要用于基因組DNA靶序列和RNA反轉(zhuǎn)錄后的cDNA靶序列檢測。本品所含熒光染料SYBR Green I可以與所有的雙鏈DNA相結(jié)合，使該產(chǎn)品可用于不同靶序列的檢測而不需合成特異性標記探針。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase能有效減少在常溫條件下由引物和模板非特異性結(jié)合或引物二聚體而產(chǎn)生的非特異性擴增，酶的激活僅需在95℃孵育20s。整個PCR反應(yīng)過程比普通反應(yīng)可節(jié)省約40分鐘，大大縮短了PCR的反應(yīng)時間。PCR緩沖體系與熱啟動酶的組合，有效抑制了非特異產(chǎn)物的產(chǎn)生，并顯著提高PCR的擴增效率。該產(chǎn)品應(yīng)用范圍廣，適用于普通和快速定量PCR程序，可適用于無需ROX校正的所有熒光定量PCR儀。 ROX染料用于校正定量PCR儀孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號誤差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 擴增儀。不同儀器的激發(fā)光學系統(tǒng)有所不同，因此ROX染料的濃度必須與相應(yīng)的熒光定量PCR儀相匹配。 注意事項： 1、使用前請上下顛倒輕輕混勻，盡量避免起泡，并經(jīng)短暫離心后使用。 2、本產(chǎn)品中含有熒光染料SYBR Green I，保存本產(chǎn)品或配制PCR反應(yīng)液時應(yīng)避免強光照射。 3、避免反復凍融本品，反復凍融可能使產(chǎn)品性能下降。本產(chǎn)品長期保存可置于-20℃，避光。如果在短期內(nèi)需要頻繁使用，可在2～8℃保存。 4、本品不能用于探針法熒光定量PCR。 儲存條件：-20℃，避免反復凍融。 |
下列是產(chǎn)品的訂購信息!
產(chǎn)品僅用于科研。
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
快速實時熒光定量PCR預混體系 | BaFaSYBR Mixture | 5ml | GOY-F10298 |
DNA提取流程圖：
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱，離心管中加入ME(巰基乙)，(10mL加80ul，50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了)，在液氮中迅速磨成精細粉末，裝入50mL離心管，按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液，顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10min，期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)，異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清，等體積的，異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液，4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm，4℃離心20min
(8)棄上清，用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚異戊(25:24:1)抽提兩次，異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙，在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm，4℃離心20min
(12)棄上清，沉淀用70%酒精漂洗一次，干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
操作步驟：
1. 勻漿處理：
a.組織將組織在液氮中磨碎，每50-100mg組織加入1ml TRIzol，用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c.細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物分離。
3.可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
4. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
5. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
6. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙，室溫放置10分鐘。
7. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
