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間質干細胞成脂和成骨誘導分化
2017
7-18成骨和成脂誘導是鑒定干細胞的一種重要的方法，也是zui常用、報道見得zui多的方法。成骨zui常用的染色方法是茜素紅染色（堿性磷酸酶），成脂誘導zui常用是OilRedO（油紅O）染色法。下面介紹一下這兩種染色方法的原理和步驟。成骨誘導分化茜素紅染色方法和原理：茜素紅又名茜素磺酸鈉，茜素S，茜素紅S，茜素胭脂紅，1,2-二羥基蒽醌-3-磺酸鈉，1,2-二羥基蒽醌-3-磺酸鈉鹽。橙黃色或黃棕色粉末。易溶于水，微溶于乙醇，不溶于苯。1%水溶液pH為2.15，其水溶液呈淺黃褐色，加...+ -
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轉化細胞大規模培養技術的操作方式
2017
7-13轉化細胞深層培養可分為：分批式、流加式、半連續式、連續式、連續式和灌注式五種。一、分批式培養（batchculture）是細胞規模培養發展進程中較早期采用的方式，也是其它操作方式的基礎。該方式采用機械攪拌式生物反應器，將細胞擴大培養后，一次性轉入生物反應器內進行培養，在培養過程中其體積不變，不添加其它成分，待細胞增長和產物形成積累到適當的時間，一次性收獲細胞、產物、培養基的操作方式。該方式的特點:操作簡單。培養周期短，染菌和細胞突變的風險小。反應器系統屬于封閉式，培養過程中與...+ -
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腫瘤細胞培養方法
2017
7-11腫瘤細胞培養成功關鍵在于：取材、成纖維細胞的排除、選用適宜的培養液和培養底物等幾個方面。在具體培養方法方面，腫瘤細胞培養與正常組織細胞培養并無原則差別，初代培養應用組織塊和消化培養法均可。1、取材：人腫瘤細胞來自外科手術或活檢瘤組織。取材部位非常重要，體積較大的腫瘤組織中有退變或壞死區，取材時盡量避免用退變組織，要挑選活力較好的部位。癌性轉移淋巴結或胸腹水是好的培養材料。取材后宜盡快進行培養，如因故不能立即培養，可貯存于4℃中，但不宜栽過24小時。2、培養基：腫瘤細胞對培養基...+ -
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ATCC細胞轉染技術介紹
2017
7-6ATCC細胞轉染方法不同，對轉染結果影響很大。常見的轉染方法有：1.磷酸鈣法：該方法利用磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內吞原理得到瞬時或穩定轉染結果，操作簡便但重復性差，不可用于原代細胞的轉染。2.DEAE-右旋糖苷法：帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內吞，可用于瞬時轉染，方法相對簡便、結果可重復但對細胞有一定的毒副作用。3.電穿孔法：利用高脈沖電壓破壞細胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導入。穩定轉染，瞬時轉染均適用。適用性廣但...+ -
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細胞死亡的檢驗方式
2017
7-4ATCC細胞發生凋亡時具有固有的形態特征,如細胞核表現縮小、染色質邊緣化、凝集,凋亡晚期還會出現由核碎片與胞質內的部分細胞器混合在一起,且被細胞膜包裹形成的凋亡小體。DNA特異性染料(如Hoechst33342、Hoechst33258和DAPI等)可以與DNA的A-T堿基區進行非嵌入式結合,從而使細胞核著色,在紫外光激發時會出現明顯的熒光。通過熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡可以觀察細胞染色質的形態學變化、膜結構及通透性的改變,從而鑒別凋亡細胞、正常細胞及壞死細胞。細胞凋亡的形...+ -
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細胞分裂指數操作說明書
2017
6-29【實驗用品】材料：貼壁培養的ATCC細胞器材：離心機、顯微鏡、血細胞計數板試劑：Hanks液、0．25％胰蛋白酶、含10％小牛血清／胎牛血清的DMEM培養基(根據實驗需要也可以是其他種類的培養基)【實驗步驟】(1)用胰蛋白酶消化處于對數生長期的單層培養細胞，細胞置于10ml離心管中，1000r／min離心5min，棄上清。(2)加入含血清的DMEM培養基，制備單細胞懸液。(3)吹打均勻后，對ATCC細胞進行計數。(4)按2x104～5x104／ml的密度將細胞接種到24孔細胞...+ -
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細胞生長曲線的繪制操作步驟
2017
6-27ATCC細胞實驗用品材料：貼壁培養的細胞器材：24孔培養孔板、吸管、膠帽、離心管、培養皿、半對數坐標紙、蓋玻片、細胞計數板、酒精棉球、酒精燈、離心機、倒置顯微鏡、普通光學顯微鏡、超凈工作臺、CO2培養箱試劑：Hanks液、DMEM培養基(含10％小牛血清)、0.25％胰蛋白酶消化液、吉姆薩染液實驗步驟(1)消化：用0．25％胰蛋白酶溶液消化處于對數生長期的單層培養細胞，收集消化的細胞于10ml離心管中。(2)離心：500～1000r／min離心5min，棄上清。(3)加入DM...+ -
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分析培養腫瘤細胞狀態欠佳的原因
2017
6-221、腫瘤細胞培養基的新鮮程度：一般加入血清后的*培養基，2周內用完。否則血清有效成分失活，影響細胞培養。建議：*培養基一次不要配太多，200ml以下。或根據用量決定。2、細胞外源微生物的污染：細胞不宜長期體外培養，因為外源微生物污染的幾率大大提高。易發現和難發現的。影響細胞狀態。建議：實驗前凍存一批細胞，隔幾個月重新復蘇。即保證實驗所用細胞代數一致，又將外源污染的后果降到zui低。3、排除其他原因：如更換培養條件（血清、培養基等）；腫瘤細胞使用器皿的潔凈程度；人表皮黑色素細胞...+ -
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血管內皮細胞特性
2017
6-201．血管內皮細胞重要標志（1）轉化細胞第Ⅷ因子關連抗原，可以由全身所有血管內皮細胞產生，檢測這一因子主要用相應抗體。VWF有其特異性，人的VWF抗體對牛的內皮細胞沒有交叉反應。兔疫熒光間接法測定該因子，陽性細胞出現細長的熒光顆粒，在核周圍的顆粒較密，細胞邊緣顆粒較少。（2）Weibel-Palade小體，該小體是血管內皮細胞又一特異性的標志。電子顯微鏡下，呈現0.1～0.3μm,長0.5～5μm的橢圓形棒狀結構。上述的VWF就是該小體產生的。2．培養的大動脈內皮細胞形態培養的...+ -
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ATCC細胞肉眼觀察檢測方法
2017
6-15ATCC細胞一般常規檢查用肉眼即可觀察，主要看培養液的顏色和透明度的變化。培養細胞的觀察檢測方法大多數細胞適于在pH7.2～7.4條件下生長，低于pH6.8或高于pH7.6對細胞有害，甚至造成細胞退化或死亡。細胞對堿性不如對酸性的變化耐受，偏酸的條件比偏堿的環境對細胞生長有利。隨細胞數量的增多、代謝加強，釋放CO2增多，使pH降低。為了維持培養基恒定的pH，多在培養基中加入磷酸鹽等緩沖劑。對細胞無毒性，也不起緩沖作用，主要作用是防止pH迅速變動，在開瓶通氣培養或活細胞觀察時能...+ -
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細胞常見的轉染方法分析
2017
6-13ATCC細胞常見的轉染方法有：1.磷酸鈣法：該方法利用磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內吞原理得到瞬時或穩定轉染結果，操作簡便但重復性差，不可用于原代細胞的轉染。2.DEAE-右旋糖苷法：帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內吞，可用于瞬時轉染，方法相對簡便、結果可重復但對細胞有一定的毒副作用。3.電穿孔法：利用高脈沖電壓破壞細胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導入。穩定轉染，瞬時轉染均適用。適用性廣但細胞致死率高，DNA和細胞用量大，...+ -
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腫瘤細胞培養技術操作注意事項
2017
6-81.腫瘤細胞實驗進行前，無菌室及無菌操作臺(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風扇運轉10分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，且即使培養基相同亦不共享培養基，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10分鐘以上后，再進行下一個細胞株之操作。2.無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、...+
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