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質粒轉染細胞實驗操作步驟
2017
4-131.1轉化細胞細胞鋪板：將細胞按70%的匯合度接種到96孔板。1.2轉染：16h后轉染螢光素酶報告基因質粒和RNA，每個樣品設置6個復孔(1)配制DNA和轉染試劑:96孔板轉染質粒時每孔比例為pLenti：Firefly：Renilla：轉染試劑=0.2μg：0.1μg：0.01μg：0.25μL(2)稀釋好DNA及轉染試劑，常溫孵育5min(3)將稀釋好的DNA分別和轉染試劑混勻，常溫孵育20min(4)每孔棄去15μL培養基，將15μLDNA轉染混合液添加到每孔細胞樣品中...+ -
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小白鼠染色體的制備實驗方法和步驟
2017
4-11(一)轉化細胞秋水仙素處理取骨髓前3～4小時先給小白鼠經腹腔注入0.1％的秋水仙素，注射劑量為4毫克／每公斤動物體重。(二)取骨髓經秋水仙素處理的小白鼠，可用損傷脊髓法處死，然后用剪刀剪開大腿上的皮膚和肌肉，取出大腿骨和脛骨，用一小塊紗布來回搓干凈附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨兩端膨大的關節頭，然后將股骨剪碎投入小燒杯中，用2毫升1％檸檬酸鈉溶液攪爛碎骨，使骨髓細胞游離出來。靜止片刻，用吸管把懸浮液吸到離心管中，可重復沖洗一次。此時離心管中的細胞懸浮液可達4～5毫升。(三)低滲...+ -
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細胞凋亡的變化分析
2017
4-6轉化細胞凋亡大多為生理性死亡，是細胞衰老過程中各個細胞功能逐漸減退的結果。凋亡可見于許多生理和病理過程中，如各種更替性組織衰亡更新，也可見于照射及應用細胞抑制劑和數目性萎縮之時。腫瘤細胞也發生凋亡。這種壞死是活體內單個細胞或小團細胞的死亡，不是整個實質區內細胞同時死亡，死亡細胞的質膜(細胞膜和細胞器膜)不破裂，不引發死亡細胞的自溶也不引起急性炎癥反應。凋亡的發生與基因調節有關。也有人稱為程序性死亡(PCD)。轉化細胞凋亡對人體的生理平衡和疾病的發生具有重要意義。電鏡下凋亡的細...+ -
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ATCC細胞培養中使用血清的缺點
2017
4-1ATCC細胞培養中使用血清的缺點血清成分復雜，雖含許多對細胞有利成分，也含有對細胞有害的成分，使血清有幾個明顯的缺點：1.對大多數細胞，在體內狀態，血清不是它們接觸的生理學液體，只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清，因此使用血清有可能改變某種細胞在體內的正常狀態，血清可能促進某些細胞的生長(成纖維細胞)同時抑制另一類細胞生長(表皮細胞)。2.血清含一些對細胞產生毒性的物質，如多胺氧化酶，能與來自高度繁殖細胞的多胺反應(如精胺、亞精胺)形成有細胞毒性作用的聚精胺。補體、抗...+ -
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新生大鼠頸上交感神經元分散細胞培養
2017
3-30干細胞交感神經系統在維持機體的正常功能和對環境的適應性反應中起著十分重要的作用。交感神經細胞培養特別有助于神經細胞發育和可塑性研究，利用體外培養系統可進行交感神經細胞的發生、死亡、形態和生化發育、遞質表形的獲得，以及靶組織與傳入纖維的突觸形成的研究。此外，通過體外培養系統可獲得關于神經營養因子、激素，細胞因子等調節交感神經元發育的信息，了解傳入纖維的輸入以及與靶組織的的機制。1、材料和方法實驗用出生當天的昆明種大鼠，在無菌條件下腹部朝上固定于塑料泡沫板上,用微解剖鑷在解剖顯微...+ -
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CO2培養箱如何消毒
2017
3-28干細胞CO2培養箱如果是隔水式培養箱可以采用甲酸熏蒸(甲醛與高錳酸鉀反應生成甲酸)，然后再用75%酒精擦培養箱內壁即可，效果比較好。如果是氣套式的培養箱用75%酒精直接擦培養箱內壁即可，或采用隔水式熏蒸，但熏蒸前要先將二氧化碳和溫度探頭封閉好，防止甲酸腐蝕。干細胞CO2培養箱是實驗室*的儀器，但因其中需放置盛水容器而濕度較高，從而導致霉斑(經培養鑒定為絲狀真菌)快速生長而影響工作，有礙觀瞻和可能導致試驗樣本污染或院內感染擴散。雖使用了硫酸銅溶液、75%乙醇溶液或紫外線照射等多...+ -
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冷凍細胞活化操作
2017
3-231、ATCC細胞冷凍細胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶重新結晶而對細胞造成傷害，導致細胞之死亡。2、細胞活化后，約需數日，或繼代一至二代，其細胞生長或特性表現才會恢復正常(例如產生單株抗體或是其它蛋白質)。3、材料37℃恒溫水槽、新鮮培養基、無菌吸管/離心管/培養瓶、液氮或干冰容器4、ATCC細胞步驟：(1)操作人員應戴防護面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害。(2)自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過程，此時蓋子易松掉。(3)將新鮮培養基置于37...+ -
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冷凍ATCC細胞活化技術分析
2017
3-21冷凍ATCC細胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶重新結晶而對細胞造成傷害，導致細胞之死亡。細胞活化后，約需數日，或繼代一至二代，其細胞生長或特性表現才會恢復正常(例如產生單株抗體或是其它蛋白質)。材料37℃恒溫水，新鮮培養基，無菌吸管/離心管/培養瓶，液氮或干冰容器步驟：操作人員應戴防護面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害。自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過程，此時蓋子易松掉。將新鮮培養基置于37°C水槽中回溫，回溫后噴以70%酒精并擦拭之，移入無...+ -
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骨髓瘤細胞懸液的制備方法分析
2017
3-16zui常用的干細胞系為SP2/0和NS-1，均來自BALB/c小鼠骨髓瘤。一般在準備融合前的兩周就應開始復蘇骨髓瘤細胞，為確保該細胞對HAT的敏感性，每3～6個月應用8-氮雜鳥嘌呤篩選一次，以防止細胞的突變。骨髓瘤細胞懸液的制備方法如下：1．將剛復蘇的瘤細胞培養于含10％胎牛血清的RPMI1640培養液中，5%C02,37℃溫箱孵育。每2～3天換液一次，3～5天傳代一次，待細胞生長穩定后方可供細胞融合用。于融合前48～36小時，將骨髓細胞擴大培養（一般按一塊96孔板的融合試驗...+ -
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腫瘤細胞培養實驗操作分析
2017
3-14腫瘤細胞培養實驗原理：是將機體內的某組織取出，分散成單細胞，在人工條件下培養使其生存并不斷生長、繁殖的方法。借助這種方法可以觀察細胞的分裂繁殖、細胞的接觸抑制、以及細胞的衰老，死亡等生命現象。腫瘤細胞動物的選擇：選擇大約一半足孕時間的胚胎，10－13天齡胚胎含有zui大數量的未分化的間質細胞，成纖維細胞可從這些細胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個實驗材料：每組的超凈臺中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml0.25%胰蛋...+ -
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細胞消化的操作步驟
2017
3-91.絕大部分干細胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可。吸去胰酶后，殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足夠消化細胞。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞，連續這樣傳代，對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去，胰酶潤洗吸去，然后37℃消化。比較難消化的細胞（潤洗方法5min還不能消化），這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育。2.細胞如何算是消化好了呢？不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了，一般你肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了，...+ -
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死活細胞測定及細胞活力測定實驗原理
2017
3-7(1)干細胞細胞膜通透性的差異：活細胞的細胞膜是一種選擇性膜，對細胞起保護和屏障作用，只允許物質選擇性的通過;而細胞死亡之后，細胞膜受損，通透性增加。(2)死活細胞在代謝上的差異：由于活細胞中新陳代謝的作用，使細胞內具有較強的還原能力，而死細胞或代謝緩慢的老細胞，則因它們的無還原能力或還原能力極弱。常見的細胞染料有：中性紅(細胞器的專有染料)、臺盼藍、甲基藍、美藍、熒光素雙醋酸酯(FDA)等。①中性紅染色：常用染料之一，是細胞器的專有染料。利用干細胞膜的通透性差異，用來染原生...+
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