人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞；T47D 圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞；T47D 圖片
形態(tài)特性  上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  T-47由I Keydar分離自一位54歲乳房侵入性導(dǎo)管癌的女性患者的胸腔積液；分化的上皮亞株(T-47D)有細(xì)胞質(zhì)連接和17β雌二醇及其他類固醇激素、降鈣素的受體；表達(dá)WNT7B癌基因。 
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；0.2 Units/ml牛胰島素
傳代方法  1:3~1:5傳代，每周換液2~3次。
傳代情況 P99
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR  Amelogenin：X；CSF1PO：11，13；D13S317：12；D16S539：10；D18S51：17；D19S433：14；D21S11：28，31；D2S1338：24；D3S1358：15，17；D5S818：12；D7S820：11；D8S1179：13；FGA：23；TH01：6；TPOX：11；vWA：14；
同工酶 
染色體  56~65
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

WB600 枯草宿主菌菌種1mL
131035-30人培養(yǎng)細(xì)胞基因組 DNA30μg
130960-100超螺旋 DNA 分子量標(biāo)準(zhǔn)100uL
雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（Annexin V- 熒光素 488·PI） 50 次
HRP 標(biāo)記的抗生物素抗體10μL
葉酸5g
弗氏不*佐劑10mL
CAS114162-64-05- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚葡萄糖苷5mg
21-0090-5 色素細(xì)胞生長因子 - 不含 TPA5mL
60501-20一管式拭子 DNAout20 次
RecJf 核酸外切酶1000U
Deaza dGTP0.4mL
96 孔板病毒 RNAout( 離心法 )5次
T4 核酸內(nèi)切酶 V2000U
CAS633-03-4亮綠5g
12-216SMD1163 酵母菌種1mL
一站式 CTAB-PAGE 電泳套裝30 次
克必隆 eTS miRNA RT-PCR 試劑盒10 次FORSYTHOSIDE A連翹脂苷 A79916-77-1
3-Hydroxy-2,4,6-tribromobenzoic acid2,4,6-三溴-3-羥基酸14348-40-4
TERT-BUTYL ETHYL ETHER叔丁基637-92-3
3-Bromothiophene3-溴噻吩872-31-1
Calix[4]arene杯[4]芳烴74568-07-3
Genistin染料木苷529-59-9
cis-3-Hexenyl lactate順式-3-己醇乳酸酯61931-81-5
1-Butyl-3-methylimidazolium tetrafluoroborate1-丁基-3-基咪唑四酸174501-65-6
Decylbromide溴代正癸烷112-29-8
NA芽孢染色液
(2R,3R)-2-Amino-3-methylpentanoic acidD-異亮氨酸319-78-8
ALLYLPHOSPHONIC DICHLORIDE二化丙基膦1498-47-1
Trifluoro(methanol)boron三化醇373-57-9
Sodium acetate乙酸127-09-3
Potassium permanganate高錳酸鉀7722-64-7
p-Toluic acid對酸99-94-5
2-ACETAMIDOFLUORENEN-(2-芴基)乙酰胺53-96-3
4-Butylphenol4-丁基酚1638-22-8
5-Amino-2-methylpyridine5-氨基-2-基吡啶3430-14-6
吐溫 -20100mL
McCoy's5A 培養(yǎng)基 ( 含 1% 雙抗 +10% 小牛血清 )500mL