熒光素酶轉(zhuǎn)染人成骨肉瘤細(xì)胞；U2OS-Luc teT-on圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 熒光素酶轉(zhuǎn)染人成骨肉瘤細(xì)胞；U2OS-Luc teT-on圖片
形態(tài)特性  上皮樣；多角形
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  表達(dá)熒光素酶，帶四環(huán)素開關(guān)。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%Tet system 提供的胎牛血清；200 μg/ml G418
傳代方法  1:2~1:4傳代，每周2次換液。
傳代情況 C3
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR  Amelogenin：X；CSF1PO：12，13；D13S317：13；D16S539：11，12；D18S51：12，14；D19S433：15；D21S11：31；D2S1338：20，24；D3S1358：16，OL；D5S818：8，11；D7S820：11，12；D8S1179：12，14；FGA：20；TH01：6，9.3；TPOX：11，12；vWA：14，18；
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

小鼠抗 Flag 標(biāo)簽單抗1000μL
130651-100DNA 促旋酶 (E.coli)100U
51208A-0.5 dNTP 溶液，2.5mM0.5mL
天門冬酰胺酶250U
ER2566 菌種1mL
Hanks 溶液100mL
鏈霉親和素，HRP 標(biāo)記0.1mL
CAS79-06-1丙烯酰胺100g
131129C-100植物種屬鑒定 PCR Mix 3100 次
XTT 細(xì)胞增殖與細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒500 次
肝素瓊脂糖50mL
D- 葡萄糖 -1- 磷酸二1g
柱式昆蟲 mtDNAout，測(cè)序10 次
CAS28166-41-8α- 氰基 -4- 羥基肉桂酸10g
12-229C600 菌種1mL
血液線粒體和核 DNA 雙提試劑盒 25 次
紅細(xì)胞裂解液 A 型 ( 核酸純化 ) 100mL
對(duì)硝基苯磷酸二鹽1g
磷酸蛋白染色試劑盒10 次
CAS111-30-8戊二醛，25% 水溶液10mL
130899-100GAL 指示劑培養(yǎng)基100mL
胰蛋白酶，質(zhì)譜100μgBOC-[15N]GLY-OHBOC-GLY-OH-15N106665-75-2
Tri-n-octylamine三胺1116-76-3
Cremophor EL聚氧乙蓖麻油EL61791-12-6
4-Fluoro-5-methoxy-2-methyl-1H-indole2-基-4--5-氧基-1H-吲哚288385-93-3
1-Hydroxy-7-azabenzotriazoleN-羥基-7-氮雜并三氮唑39968-33-7
N-Cbz-L-PhenylalanineN-芐氧羰基-L-丙氨酸1161-13-3
Tributyl borate酸三丁酯688-74-4
3-Aminopropyl-methyl-diethoxysilaneγ-氨丙基基二乙氧基硅烷3179-76-8
Bromo hydrazine溴化肼
3,5-Dinitro-2-methylbenzoic acid2-基-3,5-二基酸28169-46-2
3-(Dimethyl-octylazaniumyl)propane-1-sulfonate硫代甜菜 815178-76-4
Carrageenan卡拉膠11114-20-8
Lithium acetate dihydrate乙酸鋰,二水6108-17-4
Ethyl hydrogen malonate丙二酸單乙酯1071-46-1
Pseudoginsenoside RT5擬人參皂甙 RT598474-78-3
Ciclopirox環(huán)吡胺29342-05-0
Brilliant Green Lactose Bile Broth煌綠乳糖膽肉湯
1-Chloro-2-iodobenzene鄰碘615-41-8