Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞；231-Cas9-545價(jià)格質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。

Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞；231-Cas9-545價(jià)格操作步驟：

1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱
形態(tài)特性  上皮樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使MDA-MB-231細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。 
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；400ug/ml G418
傳代方法  1:2~1:4傳代；每周2~3次。
傳代情況 C3
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR  Amelogenin：x,x；CSF1PO：12,13；D12S391：17,18；D13S317：13,13；D16S539：12,12；D18S51：11,16；D19S433：11,14；D21S11：30,33.2；D2S1338：20,21；D3S1358：16,16；D5S818：12,12；D6S1043：18,18；D7S820：8,9；D8S1179：13,13；FGA：22,23；Penta E：11,11；TH01：7,9.3；TPOX：8,9；vWA：15,18；
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。

6- 磷酸葡萄糖鋇鹽100mg
羥脯氨酸測(cè)試盒 ( 消化法 )( 測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞、培養(yǎng)液 )48 T
一站式 His 標(biāo)記蛋白質(zhì)微量純化套裝20 次
100301-1秋水仙素溶液1mL
130970-50柱式 G+細(xì)菌 RNAout50 次
內(nèi)毒素清除親和介質(zhì)50mL
9° N DNA 連接酶2500U
Di-2-ANEPEQ 5mg
甲基化專一性 PCR 試劑盒50 次
22-0220-5Dihydroethidium( 超氧化物陰離子熒光探針 )5mg
120657-1帶柄尼龍篩1個(gè)
葡聚糖 T-50010g
包涵體大量純化試劑盒2次
Superoxide dismutase( 抗氧化酶 )2mg
堿性磷酸酶，大腸桿菌25U
23-0790-2Trequinsin(PDE III 抑制劑 )2mg
130948-10百萬堿基細(xì)菌 (G-)DNAout10 次AZELAIC ACID DI(2-ETHYLHEXYL) ESTER壬二酸二酯103-24-2
6-Fluoro-4-chromanone6-并二氫吡喃-4-66892-34-0
Diethyl isopropylidenemalonate異亞丙基丙二酸二乙酯6802-75-1
1,2-HEXADECANEDIOL1,2-十六烷二醇6920-24-7
4-Chlorobutyryl chloride4-丁酰4635-59-0
Pranoprofen普拉洛芬52549-17-4
2'-Hydroxy-5'-methoxyacetophenone2-羥基-5-氧基乙705-15-7
NA蛋清粉
CHOLIC ACID METHYL ESTER膽酸酯1448-36-8
LEAD(II) ACETYLACETONATE乙酰丙鉛15282-88-9
Perilla leaf oil紅紫蘇葉油68153-38-8
DL-Menthol薄荷腦89-78-1
Iminodiacetonitrile亞氨基二乙628-87-5
Sodium taurocholate牛磺膽酸145-42-6
HAFNIUM鉿標(biāo)準(zhǔn)溶液7440-58-6
DIRECT FAST BROWN M直接紅棕M2429-82-5
Octadecyl 3-(3,5-di-tert-butyl-4-hydroxyphenyl)propionate抗氧劑10762082-79-3
Tetrabutylphosphonium chloride四丁基化膦2304-30-5
DIETHYLAMINO HYDROXYBENZOYL HEXYL BENZOATE二乙氨基羥酰基酸己酯302776-68-7
Oxobutanedioic acid草酰乙酸328-42-7
CHLORIDE STANDARD離子（Cl-）標(biāo)準(zhǔn)溶液16887-00-6
NAECL化學(xué)發(fā)光液
2,4,6-Trimethylbenzoyl chloride2,4,6-三基酰938-18-1
2,6-DIMETHYLNAPHTHALENE二基萘28804-88-8
4-Methoxyphenylacetone對(duì)氧基基丙122-84-9
Giemsa stain吉氏色素51811-82-6
RNase-free 鹽酸胍溶液 ,8M100mL
超微量 ATP 酶測(cè)試盒 ( 測(cè) Na+K+ATPase)25 T
一管式拭子 DNAout100 次