Hela 細(xì)胞耐藥亞株；HeLa /DDP圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 Hela 細(xì)胞耐藥亞株；HeLa /DDP圖片
形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  Hela/DDP細(xì)胞是湖醫(yī)二院腫瘤所陳惠楨教授等用藥物劑量增選法篩選獲得的Hela細(xì)胞耐藥亞株。該細(xì)胞除耐順鉑（DDP）外，其它特性均與Hela細(xì)胞系相似，可用于常規(guī)的耐藥研究。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C30
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR  STR鑒定
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

CAS118-00-3鳥苷5g
60207-10氯溶液 ,25mg/mL10mL
乙基二甲基胺丙基碳化二亞胺1g
酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒20 次
丙烯葡聚糖凝膠 S-100 HR150mL
DNA  Acryl 助沉劑1mL
CAS1320-06-5油紅 O5g
140595-100小鼠抗 Trx 標(biāo)簽蛋白單抗 100 μL
植物種屬鑒定 PCR Mix 8100 次
L- 天門冬酰胺25g
果膠25g
COX IV 小鼠單抗1000 μL
CAS7681-49-4氟化25g
81225-250Tricine-SDS-PAGE 配膠液250mL
自誘導(dǎo)培養(yǎng)基 (lac 啟動子 )200mL
羅丹明 B10g
糜蛋白酶原1 g
超氧化物試劑盒100 次
CAS9001-51-8己糖激酶2.5KU
131158-0.1山羊抗兔 IgG，熒光素 488 標(biāo)記0.1mg
130829-50天凈沙細(xì)胞蛋白質(zhì) -RNA 雙提取試劑盒 50 次
N-2- 羥乙基 -N’-2- 乙基磺酸25g
5- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚 -β-D- 半乳糖苷100mg柱式 DNA 清除劑50 次
CAS9010-34-8牛甲狀素蛋白10mg
101112-50柱式水樣 DNAout50 次
EHA105 農(nóng)桿菌菌種1mL
山羊抗兔 IgG，藻紅蛋白標(biāo)記0.1mg
21-0220-5內(nèi)皮細(xì)胞生長因子5mL
120654B-20Southern DNA Marker(DIG)20 次
130979-50柱式血清血漿 DNAout50 次
菌種保存液10 管
DiIC1(5) 碘化物100mg
131037-100Tfl DNA 聚合酶100U
溴甲酚紫5g
DEAE 纖維素100g
10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝已滅菌帶芯長尖 )96 支
植物種屬鑒定 PCR Mix 4100 次
CAS94-75-72,4- 二氯苯氧5g
α-Tubulin 小鼠單抗30μL
超微量 ATP 酶測試盒 ( 可測總 ATPase)25 T
單細(xì)胞裂解液 (RNA)1mL
130574-1000小鼠抗 Flag 標(biāo)簽單抗1000μL