青色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)直腸癌細(xì)胞；HCT116-CFP圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 青色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)直腸癌細(xì)胞；HCT116-CFP圖片
形態(tài)特性  上皮樣；多角形
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  CFP穩(wěn)定表達(dá) 
培養(yǎng)條件  IMDM: Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium  10%FBS
傳代方法  1:3傳代；3~4天1次。
傳代情況 
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

T4 RNA 連接酶 2( 截短型 )2000U
蛋白酶 K 溶液，10mg/mL1.5mL
Tricine-SDS-PAGE 配膠液1000mL
小鼠抗 GFP 標(biāo)簽單抗100μL
131027-250胃蛋白酶250mg
130914-2dGTP 溶液，2.5mM2mL
通用洗柱液250mL
二硫赤蘚醇1g
α- 環(huán)狀糊精250mg
絲狀真菌線粒體 DNAout15 次
CAS56-41-7L- 丙氨酸25g
131129N-100轉(zhuǎn) Lectin 基因植物 PCR Mix100 次
細(xì)胞計(jì)數(shù)液 (Vi-CELL 儀 )100 次
剛果紅5g
赤蘚紅 B 二鹽5g
DNA 上樣液 ( 紅 ),6×( 非甘油 )10mL
CAS9007-43-6細(xì)胞色素 C100mg
12-235JF1125 菌種1mLSolvent Violet 13試劑81-48-1
Diflubenzuron除蟲脲35367-38-5
Cobalt sulfate heptahydrate硫酸鈷，七水10026-24-1
2-Carboxybenzaldehyde鄰羧基119-67-5
Hexyl acetate乙酸己酯142-92-7
(R)-(+)-2,2'-Bis(diphenylphosphino)-1,1'-binaphthyl(R)-(+)-2,2'-雙(二膦基)-1,1'-聯(lián)萘76189-55-4
Ethylenediaminetetraacetic acid乙四乙酸60-00-4
6-THIOGUANOSINE6-硫鳥嘌呤核苷85-31-4
Bisoprolol fumarate富馬酸比索洛爾104344-23-2
ADENOSINE-5'-MONOPHOSPHATE DISODIUM SALTAMP149022-20-8
(1S,2S)-(+)-N-(4-Toluenesulfonyl)-1,2-diphenylethylenediamine(1S,2S)-(+)-N-對(duì)磺酰基-1,2-二基乙167316-27-0
Ethyl isobutyrate異丁酸乙酯97-62-1
Sodium levothyroxine左旋狀腺素25416-65-3
3-(3-AMINOPHENYL)PROPIONIC ACID間氨基丙酸1664-54-6
Eugenol丁香酚97-53-0
NA水質(zhì)標(biāo)樣
NA有機(jī)擔(dān)體
Aminomethanesulfonic acid氨基磺酸13881-91-9
N-Boc-1,4-cyclohexanediamineN-Boc-1,4-環(huán)己195314-59-1
3,5-Dimethylphenylacetic acid3,5-二基乙酸42288-46-0
亞精胺 ( 精脒 )1g
環(huán)狀 DNA 全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次
地塞米松100mg
堿性磷酸酶標(biāo)記親和素100mg